KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM ĐỘ PHÂN TÁN NHIỄM SẮC THỂ TINH TRÙNG

Abstract

Sự phân mảnh DNA tinh trùng là một trong những rối loạn vật chất di truyền có thể dẫn đến tình trạng vô sinh ở nam giới. Để xét nghiệm mức độ phân mảnh DNA tinh trùng có thể sử dụng phương pháp xét nghiệm mức độ phân tán nhiễm sắc thể tinh trùng. Tuy nhiên, chi phí nhập bộ Kit dùng cho xét nghiệm này (Halosperm Kit) từ nước ngoài về vẫn còn tương đối cao. Vì vậy, đề tài được thực hiện nhằm mục đích khảo sát 2 yếu tố quan trọng trong xét nghiệm mức độ phân tán nhiễm sắc thể tinh trùng là thời gian ly giải mẫu tinh trùng và nồng độ thuốc nhuộm giemsa để bước đầu lựa chọn được các điều kiện phù hợp nhất góp phần xây dựng quy trình xét nghiệm mức độ phân tán nhiễm sắc thể tinh trùng với độ tin cậy tương đương và giá thành rẻ hơn so với bộ Kit. Trong nghiên cứu này, tinh trùng thuộc 3 giống lợn: Landrace, Duroc và Du-land được chuẩn bị bằng cách ly tâm để loại bỏ môi trường pha loãng và giữ trong dung dịch đệm PBS. Tinh trùng sau đó được trộn vào agarose LMP, nhỏ lên lame đã được phủ bởi agarose EEO, để khô và tiến hành biến tính. Tiếp theo, mẫu được ly giải trong 4 khoảng thời gian khảo sát là 15 phút, 20 phút, 25 phút và 30 phút. Cuối cùng, các mẫu được rửa giải, khử nước rồi tiến hành khảo sát nồng độ thuốc nhuộm giemsa với 3 mức là 10%, 30% và 100%. Kết quả cho thấy: Các mẫu tinh trùng lợn được ly giải trong 25 phút và nhuộm với giemsa ở nồng độ 30% cho hình ảnh vòng halo rõ ràng, dễ dàng phân biệt với nền agarose và đầu tinh trùng mà ít gây các tổn thương hình thái nhất. Kết quả của nghiên cứu này được xem là tiền đề để hoàn thiện quy trình xét nghiệm mức độ phân tán nhiễm sắc thể tinh trùng trong các nghiên cứu tiếp theo, từ đó thử nghiệm trực tiếp trên tinh trùng người. Từ khóa: phân mảnh DNA tinh trùng, xét nghiệm độ phân tán nhiễm sắc thể.