Tinh sạch catalase bằng phương pháp cải tiến và một số tính chất của enzyme

Abstract

Catalase (EC 1.11.1.6) là một trong những enzyme thuộc hệ thống chống oxi hóa, bảo vệ cơ thể khỏi các stress oxi hóa nhờ khả năng phân hủy hydrogen peroxide thành nước và oxi phân tử. Bài báo này trình bày kết quả tinh sạch catalase từ gan bò theo một quy trình cải tiến và một số tính chất của nó. Bằng việc kết tủa chọn lọc với acetone, tiếp nối sắc ký qua cột trao đổi anion DEAE-sepharose và trao đổi cation CM-sepharose, catalase của gan bò được tinh sạch tới mức đồng nhất về điện di, được thể hiện với một băng protein khoảng 60 kDa trên gel SDS-PAGE. Chế phẩm enzyme tinh sạch có hoạt độ riêng lên tới 79.277 U/mg protein, hiệu suất thu hồi 1,87% và có độ sạch tăng lên gần 60 lần. Các thí nghiệm phân tích trên gel không biến tính cho thấy, catalase của gan bò là một homotetramer với khối lượng phân tử khoảng 240,987 Kda. Enzyme hoạt động tối thích ở pH 7,0, nhiệt độ 37oC và vẫn giữ được hoạt động ở pH 5,0-10,0, nhiệt độ 4-40oC. Tuy vậy, enzyme bị bất hoạt ở nhiệt độ 60oC trong 30 phút. Hoạt độ của catalase được hoạt hóa bởi Ca2+ và bị ức chế bởi Na-, Cu2+, Zn2+, Fe2+, F3+ và NaN3. Trong điều kiện thích hợp giá trị Km và Kcat/K, tương ứng là 23,69 mM và 5.106 (M.giây)-1.