Sự phối hợp của endoglucanase a và exoglucanase s tái tổ hợp tiết bởi tế bào chủ bacillus subtilis WB800N

Abstract

Việc xây dựng cách tiếp cận để khảo sát hoạt động phối hợp giữa các tiểu đơn vị enzyme là một nhu cầu cần thiết trong định hướng tạo dòng và biểu hiện ngoại bào các thành phần của cellulosome. Enduglucanase A (CelA) và exoglucạnase S (Gets) là hai cellulase biểu hiện mạnh trong phức hệ cellulosome của vi khuẩn kị khí, ưa nhiệt Clostridium tkermocellum. Trong khi endoglucanasc thể hiện hoạt tính rõ rệt với cơ chất cellulose tan carboxymethyl cellulose (CMC) thì exoglucanase vẫn chưa có cơ chất dạng tan chuyên biệt. Trong nghiên cứu này, hai enzyme CclA và CelS được tạo dòng và biểu hiện ngoại bào trong chủng chủ Bacillus subtilis WB800N. Kết quả phân tích dịch ngoại bào của các chủng tái tổ hợp bằng Tandem Mass spectrometry cho thấy protein tái tổ hợp đã được tiết thành công. Nhằm đánh giá hiệu quả phối hợp hoạt tính của CclA và CclS. dịch ngoại bào của từng chủng chủ được thu nhận và trộn theo các tỉ lệ khác nhau. Hoạt tính CMCase từng enzyme và hỗn hợp hai enzyme được đo bằng quy trình định lượng đường khử dinitrosalicylic acid trên đĩa 96 giếng. Phần lớn giá trị hoạt tính CMCase ở các tỉ lệ trộn đều cao hơn tổng giá trị hoạt tính của từng enzyme. Điều này cho thấy có sự cộng hưởng hoạt tính giữa 2 enzyme này trong quá trình thủy phân CMC, Dịch ngoại bào chứa CelA và CelS ở tỉ lệ trộn 3:5 theo thể tích có hoạt tính CMCase cao hơn 35,5% tổng hoạt tính của từng dịch ngoại bào chứa riêng CelA và CelS. Nghiên cứu này cung cấp cách tiếp cận để khảo sát hoạt động phối hợp của các tiểu đơn vị enzyme trong quá trình thiết kế mini-cellulosome trong chủng chủ B. Subtilis WB800N.