Biểu hiện gen mã hóa Flavonol synthase phân lập từ chè trung du xanh (Camellia sinensis var.macrophylla) trong vi khuẩn E.coli

Abstract

Các flavonol phổ biến ở thực vật bao gồm quercetin, kaempferol và myricetin, được tổng hợp từ các dihydroflavonols (dihydroquercetin-DHQ, dihydrokaempferol-DHK và dihydromyricetin - DHM) bởi flavonol synthase (FLS). Ở chè, FLS được chứng minh có hoạt tính chuyển hóa dihydroquercetin thành quercetin. Gen FLS đã được tạo dòng và xác định trình tự từ giống chè trung du xanh được trồng ở Thái Nguyên. Trong nghiên cứu này, chúng tôi trình bày kết quả thiết kế vector và tối ưu biểu hiện FLS tái tổ hợp (recombinant FLS-rFLS). Vector pET32a(+)_FLS đã được tạo thành công mang cấu trúc biểu hiện FLS và được biểu hiện trong vi khuẩn E. coli Rosetta1 và E.coli Rosetta2. Sư dung IPTG 1mM cảm ứng biểu hiện rFLS ở 37oC, rFLS thu được có kích thước 52,83 kDa, tồn tại chủ yếu ở dạng không tan. Trong đó, chủng E. coli Rosetta1 pET32a(+)_FLS tạo rFLS biểu hiện ở dạng tan nhiều hơn chủng E. coli Rosetta2 pET32a(+)_FLS. Tiếp theo, chủng E. coli Rosetta1 pET32a(+)_FLS được tối ưu biểu hiện ở các nhiệt đô 30°C, 23°C và 16°C (24 và 48 giờ). Cảm ứng IPTG (1mM) sau 48 giờ nuôi ở 16°C, chủng E. coli Rosetta1 chứa pET32a(+)_FLS tạo rFLS lượng lớn ở pha tan.