Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng thuốc kháng sinh malachite green (MG) và leucomalachite green (LMG) trong thủy sản bằng phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ hai lần (LC/MS/MS)

Abstract

Dư lượng kháng sinh Malachite green và Leucomalachite green trong sản phẩm thủy sản được chiết tách bằng kỹ thuật chiết QuEChERS có cải biến và định lượng bằng hệ thống sắc ký lỏng khối phổ hai lần (LC/MS-MS). Kỹ thuật QuEChERS gồm quy trình kháng sinh được chiết bằng đệm succinate EDTA pH=4 và dung môi acetonitrile, dịch chiết được phân tách bằng MgSO4:NaCl 3:2, dịch chiết được làm sạch bằng 1gram D-SPE (SPE phân tán) MgSO4:C18 3:1, dịch chiết sau làm sạch được lọc qua màng lọc PTFE và phân tích bằng LC-MS/MS. Kỹ thuật rút ngắn thời gian phân tích, hiệu quả cao, dễ thực hiện, chi phí thấp và an toàn cho người thực hiện. Quy trình định lượng Malachite green và Leucomalachite green có RPA (Reference Points for Action) là 0.5 ppb cho tổng Malachite green + Leucomalachite green. Đường chuẩn có sự tương quan tuyến tính rất rõ rệt (R2 > 0.995) và không bị sai khác nhiều giữa các nền mẫu thủy sản. Thẩm định quy trình phân tích bằng UPLC/MS-MS cho tính đặc hiệu cao, đường chuẩn trong khoảng từ 0.2 ppb đến 1.5 ppb có sự tương quan tuyến tính rất rõ rệt ( R2 > 0.995). Malachite green và Leucomalachite green là chất cấm theo EC 808 (tổng MG + LMG ≤ 0.5 ppb) ở nồng độ 0.15 ppb mức thấp nhất cho kết quả phân tích LOQ lần lượt là LMG= 0.06 ppb và MG = 0.08 ppb. Quy trình có độ thu hồi MG trong khoảng từ 88.7% đến 105.8% và LMG trong khoảng từ 89.3% đến 115.8% trong tất cả nền mẫu được khảo sát đều đạt tiêu tiêu theo AOAC phụ lục F và độ chụm cao (RSD% của độ lặp lại dao động của MG trong khoảng từ 1.86% đến 5.55% và LMG trong khoảng 1.60% đến 5.14% tại các điểm nồng độ khảo sát và độ không đảm bảo đo của MG là 10.02% và 6.99%, của LMG là 10.10% và 5.17%). Tất cả thông số được khảo sát đều tuân theo yêu cầu của tiêu chuẩn Châu Âu EC/657/2002, các thông số khảo sát đều đạt quy chuẩn AOAC phụ lục F. Từ các kết quả thu được, quy trình hoàn toàn có thể đưa vào thực tế để định lượng Leucomalachite green và malachite green trong các nền mẫu thủy sản đồng thời có thể cải tiến để mở rộng định lượng một vài nhóm kháng sinh khác.