Phân lập, tuyển chọn và tối ưu hoá điều kiện nuôi cấy vi khuẩn nội sinh trong cây cò sen (Miliusa velutina) có khả năng sản sinh polyphenol, flavonoid và kháng oxy hoá.

Abstract

Đề tài thực hiện nhằm tuyển chọn và tối ưu hoá điều kiện nuôi cấy của các dòng vi khuẩn nội sinh trong cây cò sen (Miliusa velutina) có khả năng sản sinh polyphenol, flavonoid và kháng oxy hoá. Quá trình phân lập và nhận diện sơ bộ qua các đặc điểm hình thái được 45 dòng vi khuẩn nội sinh trong cây cò sen. Theo đó hai dòng vi khuẩn được tuyển chọn thông qua phương pháp khảo sát khả năng sản sinh polyphenol, flavonoid và kháng oxy hoá được tiến hành định danh bằng kỹ thuật PCR và giải trình tự vùng gen 16s rRNA. Kết quả cho thấy dòng vi khuẩn RCS3 có mức độ đồng hình với chi Pantoea là 99,44%, dòng vi khuẩn RCS5 có mức độ đồng hình với chi Pseudocitrobacter là 99,08%. Bốn nhân tố chính ảnh hưởng đến khả năng sản sinh polyphenol, flavonoid và kháng oxy hoá được nghiên cứu bao gồm: pH, hàm lượng D-glucose, nhiệt độ và thời gian. Kết quả nghiên cứu chỉ ra rằng điều kiện tối ưu sản sinh polyphenol, flavonoid và kháng oxy hoá của hai dòng vi khuẩn Pantoea sp. RCS3 và Pseudocitrobacter sp. RCS5 đạt được như sau: độ pH là 7, hàm lượng D-glucose là 20 g/L, nhiệt độ là 30℃ và thời gian là 48 giờ. Đối với dòng vi khuẩn Pantoea sp. RCS3, tại điều kiện nuôi cấy tối ưu sản sinh hàm lượng polyphenol, flavonoid và kháng oxy hoá theo 3 phương pháp phosphomolybdenum, phương pháp RP (Reducing Power) và phương pháp FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power) lần lượt là 34,97±1,75 mg GAE/mL dịch ngoại bào, 24,98±1,25 mg QE/mL dịch ngoại bào, 188,97±9,45 mg vitamin C/mL dịch ngoại bào, 128,83±6,44 mg vitamin C/mL dịch ngoại bào và 52,34±2,62 mg vitamin C/mL dịch ngoại bào. Đối với dòng vi khuẩn Pseudocitrobacter sp. RCS5, tại điều kiện nuôi cấy tối ưu sản sinh hàm lượng polyphenol, flavonoid và kháng oxy hoá theo 3 phương pháp phosphomolybdenum, phương pháp RP (Reducing Power) và phương pháp FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power) lần lượt là 43,75±2,19 mg GAE/mL dịch ngoại bào, 30,83±1,54 mg QE/mL dịch ngoại bào, 160,63±8,03 mg vitamin C/mL dịch ngoại bào, 150,46±7,52 mg vitamin C/mL dịch ngoại bào và 48,26±2,41 mg vitamin C/mL dịch ngoại bào.